ELISA試劑盒生物學(xué)研討離不開(kāi)定量。關(guān)于肯定定量，一般需要使用已知濃度的分子制作規(guī)范曲線。近來(lái)，研討人員介紹了一種新辦法，能使用串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)多個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行肯定定量。
在MARQUIS辦法中，關(guān)于每個(gè)待定量的肽段，研討人員建立重同位素符號(hào)的肽段。他們以不一樣的量混合這些肽段，并在安排或細(xì)胞裂解后立即將一種混合物參加每個(gè)生物樣品中。研討小組的負(fù)責(zé)人以為：“這是關(guān)鍵的一步。你要盡早參加這些肽段，這么重同位素符號(hào)肽段和內(nèi)源肽段的丟失可一起發(fā)生。
ELISA試劑盒隨后以同位素試劑符號(hào)樣品，并參加質(zhì)譜儀中。每個(gè)肽段發(fā)生兩個(gè)峰：“重”峰代表組成的（加標(biāo)）肽段，而“輕”峰代表內(nèi)源性蛋白。經(jīng)過(guò)定量前者碎片化所發(fā)生的符號(hào)離子，研討人員能發(fā)生每個(gè)肽段的規(guī)范曲線。以后他們能測(cè)定對(duì)應(yīng)內(nèi)源性肽段的信號(hào)，斷定樣品中存在多少分子。
研討小組使用MARQUIS定量了EGFR信號(hào)通路中的酪氨酸磷酸化。在幾種配體影響以后，他們?cè)诙鄠€(gè)時(shí)刻點(diǎn)定量了EGFR網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的磷酸化動(dòng)力學(xué)，完成了EGFR磷酸化位點(diǎn)的定量對(duì)比，并證明了關(guān)于每種配體，受體磷酸化在性質(zhì)上類(lèi)似，但數(shù)量上不一樣。他們還培養(yǎng)了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤異種移植物，并使用這種辦法定量了EGFR激酶按捺的效果。
據(jù)ELISA試劑盒介紹，MARQUIS能一起定量10個(gè)樣品中多達(dá)100種肽段。這只需要一臺(tái)串聯(lián)質(zhì)譜儀（如三重四級(jí)桿）、市售的同位素符號(hào)試劑，以及重同位素符號(hào)的組成肽段。每個(gè)人都能完成。咱們期望創(chuàng)建出一種適當(dāng)簡(jiǎn)略的辦法，而不需要什么竅門(mén)。